胰岛素（大鼠超敏）ELISA检测试剂盒

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【样品要求】

胰岛素elisa检测试剂盒(大鼠)可使用血清也可使用血浆作为样品。

不能使用明显溶血﹑黄疸和脂血的样品。

血清：静脉穿刺采集全血，待其凝血，在室温下离心分离血清。

血浆：将全血采集到含有抗凝剂的离心管，采集后立即离心分离。

样品的储存

样品盖好盖子后，可在实验前2-8℃下储存5天，要更长时间储存，应在-20℃下冻存。在开始实验前应避免反复冻融样品。

样品的稀释

在第一次实验中，要是样品的浓度高于最高标准品，则样品应用按实验步骤所描述的10倍或100倍稀释。在计算浓度时需乘以此稀释度。

例子：

a） 按1：10稀释： 10μL的血清+90μL的零标准品（充分摇匀）。

b） 按1：100释稀：10μL按a）稀释的血清+90μL的零标准品（充分摇匀）

检测步骤

所有的标准品、质控品和样品都必须做双份检测以确保所有微孔的检测条件都一样。

1）将所需数目的板条置于板架上。。

2）用一次性吸嘴将标准品﹑质控品和样品分别25μL加入相应的检测孔中。

3）每孔加入25μL的酶联物。

4）充分混合10秒，在此步骤中充分混合非常重要。

5）室温下温育30分钟。

6）快速弃去检测孔中的内含物，每孔加入400μL的洗涤液洗板三次，在吸水纸上拍干以除去残余液体。注意：洗板步骤是否正确操作会明显影响实验的灵敏度和精确度。

7）每孔加入50μL的酶复合物。

8）在室温下温育30分钟。

9）快速弃去检测孔中的内含物，每孔加入400μL的洗涤液洗板三次，在吸水纸上拍干以除去残余液体。

10）每孔加入50μL的底物液。

11）在室温下温育15分钟。

12）每孔加入50μL的终止液终止反应。

13）在加终止液后10分钟内于450±10nm处读取OD值。

【结果计算】

1) 计算标准品﹑质控品和病人样品的平均吸光度。

2) 以吸光率为Y轴，浓度为X轴，按照从标准品中获得的平均吸光率和其相对应的浓度值，绘制一条标准曲线。

3) 利用样品的平均吸光率，在标准曲线上得出其相应的浓度值，

4) 自动方法：使用计算机三次方模式﹑四参数模式或双对数函数的计算机程序可得到结果。

5) 样品的浓度可从标准曲线上直接获取。样品的浓度高于最高标准品的浓度则需进一步稀释。在计算浓度的时候，要乘以样品的稀释倍数。

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