孕烯醇酮Pregnenolone检测试剂盒

【产品名称】

通用名称：孕烯醇酮检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Pregnenolone ELISA

【产品规格】

96T

【预期用途】

孕烯醇酮（Pregnenolone）激素检测试剂盒可用于人血清中孕烯醇酮的定量检测。

【前言简介】

孕烯醇酮（3β-羟基-孕甾-5-烯-20-酮）是胆固醇的类固醇生成途径产生的第一种类固醇，且是所有肾上腺和性腺类固醇的共同前体。它是通过在线粒体上的胆固醇经胆固醇侧链裂解酶催化作用产生的。一旦生成，孕烯醇酮将就会被两种类固醇生成途径所利用。孕烯醇酮可通过17α-羟化酶的作用转换成17-羟孕烯醇酮或者通过3β-羟基类固醇脱氢酶的作用转换成孕酮。

在先天性肾上腺皮质增生症（CAH）中，由于3β-羟基类固醇脱氢酶或17α-羟化酶的缺乏，导致孕烯醇酮水平的升高。高水平的孕烯醇酮也发生在女性特发性多毛症中。经研究发现，孕烯醇酮的水平在性别和年龄方面差异明显，在最大水平一般发生在17岁女性和16岁男性中，然而低水平一般体现在37岁女性和38岁男性中。总的来说，女性体内的孕烯醇酮一般略高于男性。孕烯醇酮的生理机能的许多领域仍有待调查。目前有研究表明检测血清中的孕烯醇酮有助于研究其代谢产物、硫化孕烯醇酮在哺乳动物的大脑和中枢神经系统的各种影响。

【检测原理】

此孕烯醇酮（Pregnenolone）激素检测试剂盒采用的是典型的竞争法。未标记的抗原（存在于标准品、质控品和样品中）和一定量的酶标抗原竞争结合微孔板上有限的抗体结合位点。温育，洗板，加入底物液进行颜色反应，样品中抗原的量与颜色强度成反比，结果可直接从标准曲线上得到。

【主要组成成分】

微孔板          12×8孔，包被了抗孕烯醇酮多克隆抗体。

酶联物（50×）   300μL，1支，内含HRP标记的孕烯醇酮，蛋白缓冲液，无汞防腐剂

标准品A         2ml，1支，即用，内含孕烯醇酮，蛋白缓冲液，无汞防腐剂

标准品B-F       1ml，5支，即用，内含孕烯醇酮，蛋白缓冲液，无汞防腐剂。

质控品          1ml，2支，即用，内含孕烯醇酮，蛋白缓冲液，无汞防腐剂.范围见标签或质控单

洗涤液（10×）   50ml，1瓶，无离子洗涤剂的缓冲液和无汞防腐剂

分析缓冲液      17ml，1瓶，蛋白缓冲液，无汞防腐剂

TMB底物液      18ml，1瓶，内含TMB过氧化氢，不含DMF或DMSO的缓冲液

终止液          8ml，1瓶，1M硫酸

所需材料（未提供）

1） 移液器，50；100；150和300μl

2） 蒸馏水或去离子水

3） 8通道移液器

4） 定轨摇床（600rpm）或直线摇床（200rpm）

5） 酶标仪

6） 吸水纸，枪头和计时器

【储存条件】

试剂盒于2～8℃下可储存至标签上的效期。 

【样本要求】

双孔实验至少需要0.2ml的血清样本。至少要采集4-5ml的血液，待凝血完成后离心取出血清进行实验。如不能立即进行实验的，4℃条件下可储存24小时，-10℃或更低温度条件下可储存稍长时间。

【检测方法】

检测开始前，将所有试剂平衡至室温 。标准品、质控品和样品均做双孔。

标准品、质控品

标准品、质控品一旦打开，必须在14天内使用或者分装冻存起来，避免反复冻融。

酶联物

按1：50进行稀释，如：40 μL酶联物 + 2ml分析缓冲液。现配现用

洗涤液

按1:10的比例用蒸馏水进行稀释。

检测步骤

1）标准品，质控品和样品吸取50μL至相应孔内

2）每孔加入100μL现配的酶联液

3）室温（18-25℃）下震荡温育1h

4）每孔加入300μL的洗涤缓冲液洗板3次，倒去孔内液体，吸水纸上拍干（建议使用洗板机洗板）

5）如果条件允许，建议加底物液和终止液时使用8通道移液器。

6）每孔加入150μL的TMB底物液

7）室温下振荡温育10-15min（或是直到标准品A变成深蓝色）

8）按照步骤6）的加样顺序相同的间隔时间，每孔加入50μL的终止液，轻轻晃荡微孔板使其混匀

9）加入终止液后20min内在酶标仪450nm处测定OD值

*如果OD值超过450nm滤光片的检测上限，我们可用405nm或415nm代替，OD值可能会比较低，但它并不会影响样品和质控品的实验结果。

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