人肿瘤标志物CA72-4 ELISA检测试剂盒

CA72-4(癌抗原72-4)初被描述为由B72.3识别的抗原因子。B72.3是由相应的原发肿瘤转移后的膜萃取物免疫杂交生产的鼠单克隆抗体。CA72-4被证实是1MDa的粘液样糖蛋白，合成物称为TAG72（肿瘤相关抗原72）。TAG72蛋白的分子量为48KD. 血清和血浆中的CA72-4的水平升高见于某些恶性疾病，包括胰、胃、胆、结肠、乳腺、卵巢、子宫颈、子宫内膜的肿瘤。它对胃肠道和卵巢的肿瘤有很高的诊断学的敏感性。尽管在一些良性的疾病如风湿病和卵巢囊肿也发现有CA72-4的升高，但是临床研究表明，对于胃肠道和卵巢肿瘤，特异性诊断高达95％。CA72-4的水平和肿瘤的大小及分级紧密关联。CA72-4是胃肠道肿瘤的病人选择治疗学的监测和随后的护理的指标。另外合适的指标是CA199和CEA，另外，CA72-4是卵巢肿瘤的病人选择治疗学的监测和随后的护理的可靠性指标，尤其是对于CA125阴性的病人。

【检测原理】

DRG公司的CA72-4人肿瘤标志物检测试剂盒酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶免吸附实验（ELISA）。反应板上的微检测孔包被有能结合CA72-4分子上*抗原位点的单克隆小鼠抗体。一份含有内源性CA72-4的病人样本在包被孔中与酶联物进行孵育，该酶联物是一种联结有辣根过氧化物酶的抗CA72-4抗体。孵育后，用洗涤液洗去未结合的酶联物。结合上的辣根过氧化物酶的总量与样本中CA72-4的浓度成正相关。加入底物溶液后，显出的颜色强度与病人样品中CA72-4的浓度成正比。

【主要组成成分】

1. 微孔板：             12×8孔，可拆，微孔中包被抗CA72-4 单克隆抗体。

2. 标准品（0-4）： 5支 0.5ml，即用型，浓度为0，3，20，50，100U/ml，内含无水银防腐剂。

3. 高低质控：          2支 冻干粉，0.5ml，见“试剂准备"，质控品的浓度及范围请见试剂瓶标签或质控单。内含无水银防腐剂。

4. 样品稀释液：   1支，3ml，即用型，内含无水银防腐剂。

5. 酶联物：              1支 1.4ml，10倍浓缩，标记辣根过氧化物酶的抗CA72-4抗体，内含无汞防腐剂。

6. 酶联物稀释液：      1支，14ml，即用型型，含无汞防腐剂。

7. 底物液：      1支，14ml，即用型。

8. 终止液：      1支，14ml，即用型，含0.5M的硫酸，避免接触终止液，以免刺激或着烧皮肤。

9. 洗涤液（40X）：   1支，30ml。

注意：用于样品稀释的样品稀释液应视需要而定。

实验需要器材（但试剂盒不提供）

1. 酶标仪(450±10nm)。

2. 移液器

3. 吸水纸

4. 蒸馏水

5. 计时器

6. 坐标纸或是数据处理软件

检测步骤

CA72-4检测每次实验都应含有一条标准曲线。

1. 将实验所需数目的板条固定在板架上。

2. 用一次性吸嘴将20µL的标准品﹑质控品和样品加入相应的检测孔中。

3. 每孔加入100µL的新鲜配制的酶联物。*混合十秒，在此步骤里，充分摇匀十分重要。

4. 在室温下温育120分钟。

5. 快速弃去检测孔中的内含物，每孔用400µL洗涤液洗板五次，在吸水纸上用力拍板以除去残留的液体。注意：洗板步骤是否正确将直接影响到实验的灵敏度和精.确性。

6. 每孔加入100µL的底物液。

7. 在室温下温育30分钟。

8. 每孔加入100µL的终止液终止反应。

9. 在加终止液后十分钟内，室温下，于450±10nm处读取吸光率。

【结果计算】

1. 计算标准品﹑质控品和病人样品的平均吸光率。

2. 以吸光率为Y轴，浓度为X轴，按照从标准品中获得的平均吸光率和其相对应的浓度值，绘制标准曲线。

3. 利用样品的平均吸光率，在标准曲线上得出其相应的浓度值。

4. 自动方法：使用立方函数﹑四参数模式或双对数的计算机程序可得到结果。

5. 样品的浓度可从标准曲线上直接获取。样品的浓度高于.高标准品的浓度则需进一步稀释。在计算样品的浓度的时候，要乘以稀释倍数。

下面是CA72-4 ELISA的标准曲线的典型例子。

【期望值】

每个实验室必须建立自己的正常值。

以下是利用DRG公司的CA72-4人肿瘤标志物检测试剂盒（酶联免疫法）EIA-5071对正常成年人测试所得到的结果：

【注意事项】

1. 在使用前所有试剂和样品均需平衡至室温，所有试剂要充分混合但不要起泡。

2. 一旦实验开始，所有步骤都必须进行到底而不能中断。

3. 对每种试剂﹑标准品和样品使用一次性的吸嘴，以避免交叉污染。

4. 吸光率决定于温育时间和温度，在开始实验前，建议准备好所有的试剂，将需要检测的微孔板固定在板架上，这些步骤保证每次加液步骤所需时间相同而没有中断。

5. 按照一般的规律，酶反应时间与温育时间和温度成线性比例。

【生产企业】

德国 DRG Instruments GmbH

【国内售后单位】

深圳市科润达生物工程有限公司

地址：深圳市坪山区坑梓中兴路14号A栋