基孔肯雅热IgM检测试剂盒

                                                     （酶联免疫法）


产品详细

预期用途
基孔肯雅热IgM检测试剂盒能用于人血清和血浆（柠檬酸盐）中基孔肯雅热IgM抗体的定性检测。

检测原理
此试剂盒采用酶联免疫法。微孔中预包被有抗人IgM，用于结合样品中相应的抗体。洗板后，去除非结合的样品。再加入基孔肯雅热抗原液，再次洗板后，再加入生物素化的基孔肯雅热抗体。加入链霉亲和素标记结合物（酶联物），与固相的特异性的基孔肯雅热复合物结合。加入TMB底物液后，微孔中显蓝色。显色的强度与病人样品中基孔肯雅热IgM抗体的量成正比。加入终止液终止酶反应，形成黄色终点产物。后在酶标仪处450 nm读数。

组成成分
1.微孔板——12×8——包被有抗人IgM
2.样品稀释液——1×100 mL——即用型、pH7.2±0.2、黄色、白盖
3.洗涤液——1×50ml——20倍浓缩、pH7.2±0.2、白盖
4.基孔肯雅热抗原液——6瓶——冻干品、红盖
5.基孔肯雅热抗体液——1×6ml——含生物素化基孔肯雅热抗体、即用型、蓝色、白盖
6.链霉亲和素酶联物——1×6ml——含链霉亲和素标记的HRP、即用型、红色、黑盖
7.终止液——1×15ml——即用型、含硫酸、浓度0.2mol/L、红盖
8.底物液——1×15ml——即用型、黄盖
9.阳性质控——1×1.5ml——即用型、黄色、红盖
10.临界质控——1×2ml——即用型、黄色、绿盖
11.阴性质控——1×1.5ml——即用型、黄色、蓝盖

检测所需材料（试剂盒内未提供）
■酶标仪（450/620 nm）
■恒温箱（37 ℃）
■洗瓶或自动洗板机
■移液管（规格10和1000 µL）
■震荡器
■去离子水或蒸馏水
■一次性试管
■计时器


储存条件
基孔肯雅热试剂盒储存于2~8℃，能稳定保存至有效期，有效期见标签 。

检测步骤
试验前，仔细阅读说明书。严格执行说明书要求才能得到蕞优结果。如试验使用自动洗板机，建议每孔350µL，洗板5次（如手工洗，则每孔300µL，洗板3次）。试验前，确定好样品，质控品的加样布局方案。取所需板条置于板架上。
至少设
1孔（如A1）        空白对照
1孔 (如B1)         阴性质控
2孔 (如C1+D1）     临界质控
1孔（如E1）        阳性质控
如觉得有必要，建议样品和质控品都作双份检测。
试验应按同样的加样顺序加取试剂，避免不同的时间间隔造成误差。
使用新的一次性加样枪头，加各质控品、样品
调节恒温箱为37±1℃
1.加50µL质控品和稀释样品至相应各孔中，设A1作为空白对照
2.封板纸盖板
3.37 ± 1 °C温育1小时±5分钟
4.温育后，移除封板纸，倒出微孔内液体，每孔用300µL稀释洗涤液，洗板3次，避免洗涤液相互溢溅至其它微孔。每次洗板时，浸泡时间应大于5秒。后，在吸水纸上拍干，去除残留液滴。

注意：洗涤步骤很关键。不充分的洗板，会导致不精确或错误上升的吸光度值。

5.除空白对照孔（A1）外，加50µL基孔肯雅热液抗原液至各孔，盖板
6.室温下温育30分钟
7.重复步骤4
8.除空白对照孔（A1）外，加50µL 基孔肯雅热液抗体液至各孔，盖板
9.室温下温育30分钟
10.重复步骤4
11.除空白对照孔（A1）外，各加50 µL链酶亲和素酶联物至各孔，盖板
12.室温下温育30分钟
13.重复步骤4
14.加100 µL TMB底物液至各孔中
15.黑暗处，精确温育15分钟
16.按加TMB底物液的顺序和速度，加100 µL终止液至各孔中。蓝色溶液在孵育过程中变为黄色。

注意：强阳性样品会导致色原产生沉淀，沉淀的产生会对读数产生影响。所以先用阴性基质进行预稀释，建议1：1的比例稀释，然后，再1个单位的预稀释样品+100个单位的样品稀释液。终结果（以U计算）乘以预稀释因子2即可

17.加入终止液后，30分钟内，在酶标仪450/620 nm处读数

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