登革热IgG ELISA试剂盒

登革热IgG ELISA试剂盒产品详细

登革热IgG检测试剂盒预期用途

DENV Detect MAC-ELISA检测试剂是一种用来检测人是否感染登革热病毒的ELISA检测系统，登革热IgG抗体检测试剂盒可以检测出人血清中是否存在抗登革热病毒源性重组抗原（DENVRA I-IV）的IgG抗体。此诊断实验可辅助诊断人是否感染了登革热病毒。此试剂盒不能用于筛查血液或血液成分，仅供科研使用。

登革热IgG ELISA试剂盒检测原理

DENV Detect IgG ELISA试剂盒是由一种酶联扩大的两步法免疫检测系统。在此实验中，将登革热检测阴性质控（代表不反应的血清）、阳性质控和未知抗体浓度的血清样品加入到包被了抗人IgG抗体的微孔中温育，登革热IgG试剂盒的血清样品必须用样品稀释液进行稀释。温育并洗板后，用HRP标记的DENVRA特异性抗体处理。第二次温育并洗板后，加入TMB底物液进行温育。之后再加入酸性终止液，450nm处测OD值可确定底物反应的程度。当高于一定数值时（临界值），样品的吸光度值可确定样品中是否存在登革热抗体。
注意：阴性质控和弱阳性质控以内在质控形式提供，其目的是为了监测试剂盒成分的完整性。

登革热IgG ELISA试剂盒成分

登革热IgG抗体检测试剂盒提供了足够做96人份所需要的试剂。试剂盒成分如下：
登革热检测特定材料：
■人抗登革热IgG抗体包被的包被板：带板盖的板架，登革热IgG抗体包被的96孔包被板。2-8℃下储存，有效期内稳定。
■样品稀释液：1瓶，25ml，内含0.05%的Proclin防腐剂。2-8℃下储存，有效期内稳定。注意：如果出现沉淀的话，将试管旋涡下获得匀浆再使用。2-8℃下储存，有效期内稳定
■登革热检测阴性质控：1支，50ul的热灭活血清，登革热检测阴性质控可辅助监测试剂盒的完整性。-20℃至-70℃下储存，有效期内稳定，使用前快速旋转试管，收集底部溶液使用。
■登革热检测IgG阳性质控：1支，50ul的热灭活血清，登革热阳性质控可辅助监测试剂盒的完整性。-20℃至-70℃下储存，有效期内稳定，使用前快速旋转试管，收集底部溶液使用。
■10倍浓缩洗涤液：1瓶，120ml洗涤液，2-8℃下储存，有效期内稳定。
■HRP标记的即用型酶联物，1瓶，6ml，HRP标记的抗人IgG抗体，2-8℃下储存，有效期内稳定。
■Enwash：1瓶，20mlEnwash溶液。2-8℃下储存，有效期内稳定（内含0.1%的Proclin）。
■TMB底物液：1瓶，9ml液态底物液，2-8℃下储存，有效期内稳定。注意：底物液必须始终储存于避光试剂瓶中。
■终止液：1瓶，内含6ml即用型的终止液，2-8℃下储存，有效期内稳定。注意：强酸，请戴保护手套、口罩和安全镜，按照安全条理处理所有的材料。

登革热IgG检测实验所需器材但试剂盒不提供
■可在450nm处读数的酶标仪
■生物学或高纯度水
■真空泵
■洗板机
■1-10ul的单道移液器，50-200ul的单道和多道移液器。
■聚丙烯试管
■Parafilm封口膜
■计时器
■旋涡混合器

登革热IgG ELISA试剂盒检测步骤

1.阳性质控、阴性质控和未知血清都必须做双份检测（DENV和NCA共4孔）。按照说明书上的操作流程图进行操作。如果做双份检测的话，96孔板可做22个样品。
2.将实验中使用的板条标记好。注意：登革热抗原（Dengue RA）和质控抗原（NCA）已经绑定在微孔板中，布局描述如下：
Dengue RA：A-D 行      NCA： E-H 行
3.用试剂盒提供的样品稀释液将血清和质控品稀释100倍。用小聚丙烯试管进行稀释，稀释时至少需要4ul血清、阳性质控和阴性质控。如：4ul血清加396ul稀释液。
4.用单道或多道移液器将稀释好的血清、阴性质控和阳性质控各50ul加入到相应的微孔中。如下为22个样品做双份检测时的示范图。注意，所有的样品都必须用DENVRA和NCA检测。
5.用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所有板条的底部是没有覆盖的。注意：这样是为了保证温度的分布在每个孔的底部和血缘相等地散播。一旦顶部密封阻碍了蒸发，任何多余的封板胶必需被剪掉。
6.37℃下保湿温育板条30分钟，在温育器的底部放置水浴箱可达湿润的作用。注意：不要将微孔板叠放，必须单独地分层平辅。这对于温度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何气体，不要让板条接触任何湿润的物质，如湿纸巾等。
7.温育后，用洗板机洗板6次，每次每孔300ul 1×的洗涤液。
8.用多道移液器在每一微孔中加入50ul HRP标记的酶联物。
9.用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所有板条的底部是没有覆盖的。（同步骤5）
10.37℃下保湿温育板条30分钟。（同步骤6）
11.温育后，用洗板机洗板6次。
12.用多道移液器在每一微孔中加入150ul Enwash溶液。
13.室温下温育（无需盖板）5min。
14.温育后，用洗板机洗板6次，每次每孔300ul。
15.用多道移液器在每一微孔中加入75ul TMB底物液。
16.室温避光温育10min。
17.温育后，用多道移液器在每一微孔中加入50ul终止液，室温温育1min。
18.温育后，450nm处测    OD值。

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