CA72-4检测试剂盒（酶联免疫法）

中文名称：CA72-4检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：CA72-4

货号：EIA5071

产品规格：96人份/盒

注册证号：国械注进20163402609

【预期用途】CA724试剂肿瘤标志物酶联诊断试剂盒用于在人体血清或血浆中定量检测肿瘤相关抗原CA72-4(TAG-72)，仅供体外诊断使用。

【检测原理】

DRG公司的酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶免吸附实验（ELISA）。反应板上的微检测孔包被有能结合CA72-4分子上*抗原位点的单克隆小鼠抗体。一份含有内源性CA72-4的病人样本在包被孔中与酶联物进行孵育，该酶联物是一种联结有辣根过氧化物酶的抗CA72-4抗体。孵育后，用洗涤液洗去未结合的酶联物。结合上的辣根过氧化物酶的总量与样本中CA72-4的浓度成正相关。加入底物溶液后，显出的颜色强度与病人样品中CA72-4的浓度成正比。

【主要组成成分】

1.微孔板：12×8孔，可拆，微孔中包被抗CA72-4单克隆抗体。

2.标准品（标准品0-4）：5支0.5ml，即用，浓度为0,3，20，50，100U/ml

3.质控高&低：2支冻干粉，0.5ml，见“试剂准备”，质控品的浓度及范围请见试剂瓶标签或质控单

4.样品稀释液：一支，3ml，即用

5.酶联物：1支1.4ml，10倍浓缩，标记辣根过氧化物酶的抗CA72-4抗体

6.酶联物稀释液：一支，14ml

7.底物液：一支14ml，即用

8.终止液：0.5M的硫酸，一支14ml

9.洗涤液（40X）：一支30ml

注意：用于样品稀释的样品稀释液应视需要而定。

实验需要器材（但试剂盒不提供）

1.酶标仪(450±10nm)。

2.移液器

3.吸水纸

4.蒸馏水

5.计时器

6.坐标纸或是数据处理软件

【储存条件】

未开启的试剂在2-8℃下储存，在保质期内保持其稳定性。不要使用过期的试剂。所有开启了的试剂都应在2-8℃下储存，微孔板需在2-8℃下储存，一旦打开了微孔板的袋子，需小心地将其重新密封。

【样本要求】

可使用血清或血浆（使用EDTA或肝素抗凝）样品，不要使用溶血﹑脂血﹑黄疸的样品。注意：含叠氮钠的样品不能用于此实验。

样品采集

血清：

静脉采血，允许使用凝血，在室温下用离心法分离血清。全血未*凝固前请勿离心，接受了抗凝剂治疗的病人血液可能需要更长的凝血时间。

血浆：

将全血收集到含有抗凝剂的离心管内，收集后马上用离心法分离。

样品的储存

样品盖好盖子后，可在实验前2-8℃下储存5天，要更长时间储存，应在-20℃下冻存。在开始实验前应避免反复冻融样品。

样品的稀释

在z初的实验中，要是样品的浓度高于z高标准品，则样品应用按实验步骤所描述的用样品稀释液进行稀释和重新检测。在计算浓度时需乘以此稀释系数。

例子：

1.按1：10稀释：10ul的血清+90ul的样品稀释液（充分摇匀）。

2.按1：100释稀：10ul稀释a）稀释的血清+90ul的样品释稀液（充分摇匀）

【检测方法】

在使用前将所有的试剂和所需的板条平衡至室温。

质控品

在冻干粉中加入0.5ml的蒸馏水使其复溶，并至少放置10min，在使用前充分摇匀。复溶后的质控品需在-20℃下储存。

洗涤液

在30ml浓缩的洗涤液中加入1170ml的蒸馏水，z终洗涤液的容积为1200ml。稀释后的洗涤液在室温下两星期内保持稳定。

酶联物

使用酶联物稀释液按1：10稀释。配制好的酶联物在2-8℃下，一周内稳定。

如：1.2ml酶联物于10.8ml稀释液配制成z终体积12ml。

检测步骤

每次实验都应含有一条标准曲线

1.将实验所需数目的板条固定在板架上。

2.用一次性吸嘴将20ul的标准品﹑质控品和样品加入相应的检测孔中。

3.每孔加入100ul的新鲜配制的酶联物。*混合十秒，在此步骤里，充分摇匀十分重要。

4.在室温下温育120分钟。

5.快速弃去检测孔中的内含物，每孔用400ul洗涤液洗板五次，在吸水纸上用力拍板以除去残留的液体。注意：洗板步骤是否正确将直接影响到实验的灵敏度和准确性。

6.每孔加入100ul的底物液。

7.在室温下温育30分钟。

8.每孔加入100ul的终止液终止反应。

9.在加终止液后十分钟内，室温下，于450±10nm处读取吸光率。

【结果计算】

1.计算标准品﹑质控品和病人样品的平均吸光率。

2.以吸光率为Y轴，浓度为X轴，按照从标准品中获得的平均吸光率和其相对应的浓度值，绘制标准曲线。

3.利用样品的平均吸光率，在标准曲线上得出其相应的浓度值。

4.自动方法：使用立方函数﹑四参数模式或双对数的计算机程序可得到结果。

5.样品的浓度可从标准曲线上直接获取。样品的浓度高于z高标准品的浓度则需进一步稀释。在计算样品的浓度的时候，要乘以稀释倍数。

下面是CA72-4ELISA的标准曲线的典型例子。

【注意事项】

1.在使用前所有试剂和样品均需平衡至室温，所有试剂要充分混合但不要起泡。

2.一旦实验开始，所有步骤都必须进行到底而不能中断。

3.对每种试剂﹑标准品和样品使用一次性的吸嘴，以避免交叉污染。

4.吸光率决定于温育时间和温度，在开始实验前，建议准备好所有的试剂，将需要检测的微孔板固定在板架上，这些步骤保证每次加液步骤所需时间相同而没有中断。

5.按照一般的规律，酶反应时间与温育时间和温度成线性比例。