流行性出血热（汉坦型）试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人流行性出血热抗体(EHF-Ab)表达。用纯化的人流行性出血热抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中流行性出血热抗体相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的流行性出血热抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人流行性出血热抗体(EHF-Ab)的存在与否。

 

　　流行性出血热（汉坦型）标本要求：

 

　　1、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

 

　　2、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

 

　　流行性出血热（汉坦型）操作步骤：

 

　　1、编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

 

　　2、加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

 

　　3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

 

　　4、配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

 

　　5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

 

　　6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

 

　　7、温育：操作同3。

 

　　8、洗涤：操作同5。

 

　　9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

 

　　10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

 

　　11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。