肾上腺素酶联诊断试剂盒使用双抗体夹心法测定标本中人甲氧基去甲肾上腺素(MNA)水平。用纯化的人甲氧基去甲肾上腺素(MNA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次参加甲氧基去甲肾上腺素(MNA),再与HRP标记的甲氧基去甲肾上腺素(MNA)抗体结合,构成抗体-抗原-酶标抗体复合物,通过洗刷后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的甲氧基去甲肾上腺素(MNA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人甲氧基去甲肾上腺素(MNA)含量。
肾上腺素样本处理及要求:
1.血清:室温血液自然凝结10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保存过程中如呈现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保存过程中如有沉淀构成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌管搜集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保存过程中如有沉淀构成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管搜集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过重复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。保存过程中如有沉淀构成,应再次离心。
5.组织标本:切开标本后,称取重量。参加一定量的PBS,PH7.4。用液氮敏捷冷冻保存备用。标本消融后依然保持2-8℃的温度。参加一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立刻进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免重复冻融.
7.不能检测含NaN3的样品,因NaN3辣根过氧化物酶的(HRP)活性。