丁苯酞对β淀粉样蛋白(Aβ1-42)处理后U87细胞自噬性死亡的影响。方法方法将U87细胞分为Aβ组、Aβ+丁苯酞组和对照组(空白对照)。Aβ组细胞用Aβ1-42(20μmol/L)处理24 h;Aβ+丁苯酞组细胞用丁苯酞(10μmol/L)预处理0.5 h后再加入Aβ1-42(20μmol/L)处理24 h。采用MTT法测定细胞活力,检测Caspase 3活性,采用CM-H2 DCFDA检测胞内活性氧(ROS)水平,Western blotting检测LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达。结果与对照组比较,Aβ组U87细胞活力显著下降(P0.01);Aβ+丁苯酞组U87细胞活力显著高于Aβ组(P0.05)。对照组、Aβ组和Aβ+丁苯酞组之间Caspase 3活性的差异均无统计学意义(P0.05)。 与对照组比较,Aβ组U87细胞ROS水平显著升高(P0.01);Aβ+丁苯酞组U87细胞ROS水平显著低于Aβ组(P0.01)。与对照组比较,Aβ组U87细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高(P0.01);Aβ+丁苯酞组U87细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著低于Aβ组(P0.01)。结论丁苯酞通过抑制ROS介导的自噬性死亡发挥神经保护作用。
是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）。往预先包被人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
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