泌乳素（PRL） ELISA试剂盒

（德国DRG：EIA1291）

1、实验原理

   DRG公司的泌乳素酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶免吸附实验（ELISA）。反应板上的微检测孔包被有能结合泌乳素分子上*抗原位点的单克隆抗体。一份含有内源性泌乳素的病人样本在包被孔中与酶联物进行孵育，该酶联物是一种联结有辣根过氧化物酶的抗泌乳素抗血清。孵育后，用洗涤液洗去未结合的酶联物。结合上的辣根过氧化物酶的总量与样本中泌乳素的浓度成正相关。加入底物溶液后，显出的颜色强度与病人样品中泌乳素的浓度成正比。

2、试剂盒成分

1）       微量反应板，1块 （ 96孔） ，微孔中包被了抗泌乳素的单克隆抗体。

2）       酶联物，11ml，辣根过氧酶标记的泌乳素抗血清。 

3）       底物液，11ml （TMB）

4）       标准系列，6支（冻干粉），浓度：0；5；20；50；100；200ng/ml

转换系数（1ng/ml=21.1mUI/mL）

5）       终止液，0.5M的 H2SO4，6ml

3、实验需要器材（但试剂盒不提供）

1）       酶标仪（450±10nm）。

2）       移液器

3）       吸水纸

4）       标准水箱

5）       蒸馏水

6）       计时器

4、试剂贮存:

   未开启的试剂在2—8℃下贮存，在有效期内可以保持活性。不要使用过期试剂，酶联物、底物溶液、标准品和零标准品必须在2—8℃下贮存。

   微孔反应板必须在2—8℃下贮存。一旦包装袋被打开，必须将它小心地严封起来。如果包被板的包装被打开，其免疫活性在2个月内稳定，但前提是必须将它密封在装有干燥剂的袋子里。

5、样品的采集

1）       静脉穿刺采集全血，待其凝血，在室温下用离心机分离血清，避免溶血。注意：此试剂盒只能使用没用任何添加剂的样品。

2）       必须盖住样本并在实验之前于２-８℃下可贮存48小时。样品需要更长的贮存时间，则应将样品冻存于-20℃的环境下。解冻的样本在检测之前必须上下倒置几次。

注意：用于此试剂盒的样品不能含有任何添加剂。

6、试剂的准备

参考标准：在冻干的标准品中加入1.0ml双蒸水。

注：配制好了的标准品可在2-8℃下稳定存放2个月。想要存放更长时间应当将其冻存于-20℃的环境下。

7、一般注意事项

1）       实验开始前，将所有试剂和样本都平衡至室温,试剂混合时避免起泡。

2）       实验一旦开始,所有的步骤应完整地进行下去。

3）       每一样品的取样都得使用新的取样吸头。

4）       吸光度与温育时间和温度有关，在实验开始后所有的试剂都应准备好，以保证加液时间的一致。

5）       本试剂盒zui大吸光度（OD）在1.200-2.000之间（室温22℃,显色10分钟以内）。如果zui大OD值高于您酶标仪的上限或低于1.000，则相应的减少或延长显色反应的温育时间。一般情况下，酶免反应的强度与时间和温度成线性，这使得操作者应当适当的调整物理化学环境。

8、实验步骤

1）       将所需数目的板条置于板架上。

2）       将黄体生成素标准系列（0；5；20；50；100；200ng/ml）、质控和血清样本分别25μl加入到相应的微孔中，每一样品都得使用新的取样吸头。

3）       加100μl的抗泌乳素酶联物于各孔中。

4）       混匀10秒,此步骤中*混匀很重要。

5）       室温温育（22℃）30分钟。

6）       弃去孔内的反应液。

7）       用蒸馏水洗板5次。

8）       在吸水纸上把板拍干。

9）       依原先加样顺序,每孔加100μl底物液。

10）   室温（22℃）温育10分钟。

11）   按加底物液顺序,每孔加50μl终止液于各孔中。

12）   10分钟内在450±10nm波长读吸光度。

9、结果计算

1）       计算每个标准品、质控品和病人样本的平均吸光度值。

2）       用吸光度值作为纵坐标（y），浓度值作为横坐标（x），以每个标准品的吸光度值对其相应的浓度值（mIU/ml）进行标绘，作一条标准曲线。

3）       用每一样品的平均吸光度值在标准曲线上确定其相应的浓度。根据自己的实际经验或计算机的功能，也可以采用其它的归纳方法进行计算。

4）       如果样本的浓度高于zui高浓度的标准品的浓度或者浓度＞200ng/ml，则需要进行稀释，任何稀释了的样品在计算时都必须将相应的稀释因子考虑进去。

10、参考值

我们强烈建议各个实验市都建立自己的正常值和异常值。以下结果是以一定量正常人群的血液样本为准得出的实验结果：

灵敏度: zui小检测出的泌乳素浓度为0.35ng/ml

本译文仅供参考，详情请以原文为准。

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